蚕丝氨基酸含量的测定液相色谱法
E.1原理
蚕丝在高温酸性溶液中水解成游离氨基酸﹐与异硫氰酸苯酯反应后,生成的氨基酸衍生物在紫外波长有强吸收,经色谱柱分离后,紫外检测器检测,外标法定量分析。
E.2试剂和材料
E.2.1除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。E.2.2 浓盐酸:优级纯,纯度≥98%。
E.2.3乙腈:色谱纯。
E.2.4 三乙胺;分析纯。
E.2.5异硫氰酸苯酯;纯度≥98%。E.2.6 正己烷。
E.2.7 氮气;纯度99.99 %。
E.2.8冷冻剂:液氮、干冰乙醇或干冰丙酮。
E.2.9异硫氰酸苯酯-乙腈溶液(l mol/L):移取1.3 mL.于 10mL.容量瓶中,用乙腈定容至刻度,混匀。E.2.10三乙胺-乙腈溶液(1 mol/L):移取1.4 ml于 10 mL容量瓶中,用乙腈定容至刻度,混匀。
E.2.11氨基酸标准物质,纯度≥98%。
E.2.12︰标准储备液:准确称取一定质量的各氨基酸标准品,配制成浓度为200mg/L,配制的标准储备液在4℃冰箱保存,有效期3个月。
E.2.13标准工作液:准确量取标准储备液,用水稀释,依次配制成10 mg/1,30 mg/L ,60 mg/L.90mg/L,120 mg/L的标准溶液。
E.2.14︰磷酸缓冲液(10 mmol/L,pH=6.9):移取0.68 ml于 1 000ml.容量瓶中,用水定容至刻度﹐混匀,pH调节至6.9。
E.3 仪器和设备
E.3.1 高效液相色谱仪:带二极管阵列检测器。E.3.2分析天平:分度值≤0.01 mg。
E.3.3 水解管:耐压螺盖玻璃管或硬质玻璃管,体积20 mI~-30 mL。E.3.4超声波振荡器: 100W及以上。
E.3.5真空泵。
E.3.6恒温烘箱:可控范围110 ℃士2 ℃。E.3.7干燥器,内置无水硅胶。
E.3.8恒温水浴锅:能控制水浴温度55℃士3 ℃。E.3.9 容量瓶:10 mL,50 mL,100 mL,1 000mL。
